Pengetahuan

Bagaimana mengenal pasti bakteria

Posted on
Pengarang: Laura McKinney
Tarikh Penciptaan: 6 April 2021
Tarikh Kemas Kini: 1 Julai 2024
Anonim
Bacteria
Video.: Bacteria

Kandungan

Dalam artikel ini: Kenal pasti bakteria oleh pewarnaan Gram Lakukan ujian pewarnaan Ziehl-Neelsen Menyiasat tingkah laku dan penampilan bakteria Memahterpretasikan semua hasil43 Rujukan

Pengenalpastian bakteria adalah tugas yang kompleks. Salah satu sebabnya ialah, menurut anggaran, terdapat antara 10 000 dan 1 bilion spesies bakteria di dunia! Benih mengenal pasti bakteria adalah sangat penting, terutamanya dalam bidang perubatan, di mana rawatan yang tepat bagi penyakit bergantung kepada jenis mikrob yang menyebabkan masalah ini. Dalam kebanyakan kes, pengenalan dilakukan berdasarkan penghapusan. Untuk mengenal pasti bakteria, anda mesti melakukan ujian pewarnaan, menganalisis rupanya dan memerhatikan bagaimana ia bertindak balas dengan baik kepada keadaan yang berbeza. Jika anda memerlukan keputusan yang cepat, ambil sampel DNA untuk dihantar ke makmal.


peringkat

Kaedah 1 Kenal pasti bakteria oleh Gram noda

  1. menentukan jika bakteria adalah Gram positif atau negatif. Pewarnaan Gram adalah kaedah membahagikan bakteria antara dua jenis yang paling biasa: Gram positif dan Gram negatif. Yang pertama mempunyai dinding sel tebal yang terdiri daripada polimer yang dipanggil peptidoglycan, yang mempunyai pewarnaan terbaik sebagai dinding tipis bakteria Gram-negatif.
    • Sesetengah jenis bakteria Gram-positif adalah streptococci, staphylococci, micrococci (atau micrococci) dan listeria.
    • Berikut adalah beberapa contoh umum bakteria Gram-negatif: Neisseria, Acinetobacter, Moraxella, Enterobacteriaceae, Vibrio, Haemophilus, Fusobacterium dan Campylobacter.
  2. Ambil langkah perlindungan yang sesuai. Bakteria dan unsur kimia yang akan digunakan semasa ujian menimbulkan risiko kepada kesihatan anda. Pakai kacamata keselamatan, sarung tangan nitril yang boleh guna dan kot makmal apabila melakukan ujian pewarnaan. Sebaik sahaja anda selesai, letakkan sarung tangan dan bahan-bahan lain yang terkontaminasi dalam beg khas. Ingatlah untuk mengikuti prosedur makmal anda untuk menyingkirkan beg untuk produk yang tercemar.
  3. Letakkan sampel untuk melihat pada slaid kaca. Untuk memulakan ujian, letakkan sampel atau spesimen bakteria pada slaid steril. Kemudian, keluarkan bilah ke atas pembakar Bunsen menyala tiga kali untuk membetulkan sampel dan menghalangnya keluar dari pinggan apabila anda membilas atau menambah reagen.
  4. Tambah 5 titik kristal ungu ke bilah. Tuangkan lima titis penyelesaian kristal violet ke dalam sampel. Tunggu sebentar untuk sampel menyerap kelabu kristal.
    • Pegang pisau di tempat dengan pin baju supaya anda tidak noda tangan anda.
  5. Basuh bilah dengan teliti untuk mengeluarkan kotoran. Gunakan ketuhar atau botol perasan dan biarkan air berjalan dengan perlahan sehingga lima saat untuk mengeluarkan sisa tinta yang tidak mematuhi sampel.
  6. Tuangkan lima titisan Grain Diode Gram ke atas slaid. Ia adalah penyelesaian yang terdiri daripada diod, natrium bikarbonat dan kalium diodida yang menyebabkan kristal violet melebur dengan dinding sel bakteria. Tuangkan lima titisan larutan pada sampel dan biarkan selama satu minit.
  7. Basuh sampel dengan alkohol atau asid laktik. Alkohol dan lacetone adalah agen pemutihan dan akan menghapuskan pewarna dinding sel bakteria jika mereka Gram-negatif. Tuangkan beberapa titis peluntur ke dalam sampel dan biarkan ia berfungsi tidak melebihi tiga saat. Selepas itu, cuba bilas perlahan-lahan dengan air selama lima saat untuk mengeluarkan agen pemutihan ini.
    • Jika anda membenarkan peluntur bekerja untuk masa yang lama, ia boleh menyebabkan hilangnya bakteria Gram-positif, mengakibatkan negatif palsu.
  8. Lakukan ujian kontras dengan safranin. Safranin adalah pewarna merah yang berbeza dengan ungu kristal, dengan itu mewarna bakteria yang tidak dipengaruhi oleh pewarnaan ungu. Tuangkan kira-kira lima titis safranin ke dalam sampel dan tinggalkan selama satu minit. Selepas itu, cuba bilas perlahan-lahan dengan air selama lima saat.
  9. Visualisasikan sampel anda pada perbesaran 1000X. Bakteria akan menjadi ungu atau ungu jika Gram positif, atau merah jambu jika Gram negatif kerana safranin.

Kaedah 2 Lakukan Ujian Pewarnaan Ziehl-Neelsen

  1. Gunakan teknik ini untuk mengesan bakteria asid cepat. Spesies ini mengandungi lebih banyak lipid, menjadikannya lebih tahan terhadap pewarna yang digunakan dalam pewarnaan Gram. Bakteria tahan asam tergolong dalam genus Mycobacterium, yang termasuk bakteria yang bertanggungjawab terhadap tuberkulosis (M. tuberculosis). Untuk memulihkan bakteria tahan asid, anda mesti menggunakan pewarna merah yang dipanggil fuchsin karbohidrat, tahan untuk membilas dengan larutan asid atau asid sulfurik.
  2. Ambil langkah perlindungan yang sesuai. Bahan kimia dan biologi yang digunakan semasa pewarnaan Ziehl-Neelsen boleh berbahaya. Di samping itu, anda juga perlu menggunakan sumber haba, seperti muncung Bunsen, pemanas elektrik atau lampu alkohol. Ikut arahan di bawah untuk melaksanakan ujian.
    • Pakai gogal, sarung tangan nitril dan kot makmal.
    • Berhati-hati agar tidak menyedut wap dari pewarna dan peluntur dan jangan biarkan tetesan mengecilkan mata atau kulit anda. Pastikan bekas terbuka di bawah hud.
    • Berhati-hati semasa memanaskan pisau. Kebanyakan bahan kimia yang digunakan adalah mudah terbakar. Mungkin terdapat kesan bahan mudah terbakar pada slaid atau peralatan lain.
  3. Sediakan bilah. Dengan pergerakan bulat, sama rata menyebarkan sedikit sampel bakteria di pusat slaid steril. Sampel anda hendaklah menduduki kira-kira 10 mm dengan 20 mm.
  4. Keringkan pisau. Letakkan bilah pada struktur pengeringan dengan spesimen menghadap ke atas. Biarkan ia kering secara semula jadi selama 30 saat. Jangan cuba mengeringkan bilah dengan kain.
  5. Selamat sampel dengan haba. Dengan spesimen itu, luncurkan pisau dua atau tiga kali ke atas pembakar Bunsen yang menyala. Anda juga boleh meletakkan pisau pada pemanas elektrik dengan menetapkan suhu antara 65 ° C dan 75 ° C selama sekurang-kurangnya dua jam. Berhati-hati supaya tidak mendidih atau membakar sampel.
  6. Tambah fuchsin karbol ke bilah. Tuangkan beberapa titisan penyelesaian ini pada slaid. Tuangkan cukup untuk menampung sampel sepenuhnya.
  7. Panaskan pisau untuk memperbaiki pewarna tersebut. Hiaskan slaid dengan berhati-hati ke atas pembakar Bunsen atau lampu alkohol, dengan sampel yang diarahkan ke atas, atau letakkan pada pemanas elektrik. Panaskan pisau hingga 60 ° C atau hingga mula mengeluarkan stim. Biarkan pewarna selama lima minit.
    • Sekiranya anda menggunakan pemanas elektrik, hidupkan pada suhu 60 ° C. Jika anda memilih lampu alkohol atau pembakar Bunsen, anda harus mengharapkan untuk melihat asap.
    • Untuk mengekalkan bilah pada suhu yang dikehendaki selama lima minit, panaskan secara berselang-seli.
    • Berhati-hati supaya tidak mendidih, membakar atau keringkan sampel.
  8. Bilas pisau dengan air sejuk. Biarkan ia sejuk selama lima minit dan bilas perlahan selama beberapa saat dengan air yang jernih. Gunakan air paip atau botol perasan untuk mengeluarkan kesan pewarna yang tidak mematuhi sampel.
  9. Tuangkan pada sampel alkohol asid atau asid sulfurik. Gunakan volum 3% volum (v / v) alkohol atau 20% asid sulfurik untuk menampung sampel sepenuhnya. Benarkan asid berfungsi sehingga warna pudar dan mencapai warna merah jambu yang sangat terang. Proses ini biasanya mengambil masa kira-kira sepuluh minit.
  10. Gunakan air bersih untuk membilas bilah. Perlahan basuh bilah di bawah paip atau gunakan botol perasan. Keluarkan semua residu asid dan pewarna dengan baik.
  11. Tambah agen kontras. Sebaik sahaja anda membilas slaid, tuangkan pada pewarna hijau malachite atau biru metilena. Kedua-dua penyelesaian ini menghasilkan latar belakang kebiruan atau kehijauan di mana pewarna merah akan muncul, serta bahan biologi lain, seperti sel manusia dan bakteria tahan bukan asid. Biarkan bahan berfungsi selama satu hingga dua minit.
  12. Bilas dan keringkan pisau. Bilas dengan teliti dengan air untuk menghilangkan kontras yang berlebihan. Sebaik sahaja anda selesai, keringkan bahagian belakang bilah dengan kain kering dan biarkan ia kering secara semula jadi pada pendirian.
  13. Visualisasikan sampel anda pada perbesaran 1000X. Bakteria tahan asid akan berubah merah jambu merah atau gelap. Bakteria lain, sel bukan bakteria dan pangkal bilah akan menjadi hijau atau biru.

Kaedah 3 Belajar tingkah laku dan penampilan bakteria

  1. Menganalisis bentuk bakteria. Selepas melakukan ujian pewarnaan untuk menentukan sama ada bakteria Gram-positif, Gram-negatif atau tahan asid, sudah tiba masanya untuk mengenal pasti spesies lebih tepat. Pertama, analisis bentuk bakteria pada slaid. Tiga bentuk paling umum adalah cocci (bulat), spiral dan bacilli (bentuk batang).
    • Terdapat beberapa varian borang ini. Bakteria berbentuk bulat (coccus), misalnya, boleh muncul secara berpasangan (diplococci), dalam rantai, dalam timbunan atau dalam kumpulan empat (tetrads).
  2. Ketahui jika bakteria adalah aerobik atau anaerobik. Ambil dua sampel bakteria dan buat dua budaya berasingan. Bulan mesti anaerobik (tumbuh tanpa oksigen), manakala yang lain mesti aerobik (berkembang dengan oksigen). Simpan budaya anaerobik pada 35 ° C di tempat bebas oksigen selama sekurang-kurangnya 48 jam sebelum memerhatikan pertumbuhan.
    • Jika bakteria tumbuh dalam persekitaran tanpa oksigen, tetapi tidak apabila terdedah kepada oksigen, ia bermakna bahawa ia adalah anaerob.
    • Walaupun mereka berkembang dalam persekitaran yang beroksigen, tetapi tidak dengan ketiadaan oksigen, mereka aerobik.
    • Apabila mereka berkembang di kedua-dua persekitaran, kita bercakap mengenai bakteria anaerobik fakultatif.
  3. Lakukan ujian motilitas. Bakteria adalah mudah alih jika ia boleh bergerak bersendirian dengan satu atau lebih flagella. Tahap motilitas sangat penting dalam mengenal pasti spesies bakteria tertentu. Terdapat beberapa jenis motilitas, tetapi cara paling selamat dan paling mudah dibaca ialah medium separa pepejal.
  4. Buat budaya untuk ujian motilinya. Sediakan budaya bakteria dalam sup kultur. Ikuti arahan di bawah untuk menyediakan sup pilihan anda.
  5. Inokulasi budaya dalam agar separa pepejal untuk ujian motilitas. Coat sebahagian daripada budaya sup dengan jarum inokulasi steril. Berhati-hati menanam jarum dalam tabung dagar separa pepejal, seperti TTC lagar, yang telah disediakan untuk ujian. Jarum mesti menembusi 2/3 daripada agar.
    • Apabila selesai, berhati-hati mengeluarkan jarum, berhati-hati untuk tidak melebihi had zon inokulasi.
    • Inkubasi tiub pada 30 ° C selama 48 jam.
  6. Baca hasil ujian. The agar untuk ujian motilitas akan menjadi merah pada kontak dengan bakteria. Jika mereka bergerak, warna merah atau merah jambu ini akan menyebar ke seluruh bahan. Jika tidak, pewarnaan akan terhad kepada tapak suntikan.

Kaedah 4 Mentafsirkan semua keputusan

  1. Kumpulkan komen anda. Untuk mengetahui jenis bakteria, anda perlu mengumpulkan maklumat yang diperoleh dari budaya, ujian pewarna dan pemerhatian borang. Sekiranya anda sedang memeriksa sampel pesakit, gejala yang terdapat di dalamnya mungkin membantu menentukan jenis bakteria yang sesuai.
    • Sebagai contoh, jika ujian menunjukkan bahawa bakteria adalah gram-negatif, anaerobik, tidak bermotor dan anda dapati gejala-gejala seperti sakit perut, mual dan muntah dalam pesakit, kemungkinan pesakit menderita jangkitan Bacteroides. fragilis.
  2. Rujuk pangkalan data. Terdapat ribuan spesies bakteria di dunia. Tidak mustahil untuk mengetahui segala-galanya dengan hati. Anda mungkin perlu merujuk kepada buku klinik atau pangkalan data dalam talian klinikal untuk membandingkan hasil ujian dengan maklumat tentang spesies bakteria.
    • Terdapat sumber dalam talian yang sangat baik untuk mengenal pasti bakteria, tetapi kebanyakan pangkalan data ini tersedia dalam bahasa Inggeris, termasuk Patricbrc.org dan GlobalRPh. Bagaimanapun, anda masih boleh mencari maklumat yang berguna di laman web Pusat Sumber Mikrobiologi INRA Antarabangsa.
  3. Lakukan ujian genetik untuk mengetahui spesies bakteria yang tepat. Dalam sesetengah kes, anda mungkin perlu mengenal pasti spesies bakteria. Kaedah yang paling cepat dan paling mudah adalah melakukan ujian DNA. Ujian DNA juga berguna untuk mengenal pasti bakteria yang tahan terhadap bentuk tradisional pewarnaan dan budaya. Pada masa kini, ujian DNA terhadap mikroorganisma sangat cepat dan boleh siap dalam masa kurang dari dua jam.
    • Sekiranya anda tidak mempunyai akses ke makmal yang melakukan penjujukan genetik mikroorganisma, hantarkan sampel bakteria kepada agensi khusus.